Preparation of polysomal fractions from mouse brain synaptoneurosomes and analysis of polysomal-bound mRNAs.
PBN-AR
Instytucja
Instytut Biochemii i Biofizyki Polskiej Akademii Nauk
Informacje podstawowe
Główny język publikacji
EN
Czasopismo
Journal of Neuroscience Methods (25pkt w roku publikacji)
ISSN
0165-0270
EISSN
1872-678X
Wydawca
ELSEVIER SCIENCE BV
DOI
Rok publikacji
2018
Numer zeszytu
brak
Strony od-do
226-233
Numer tomu
293
Identyfikator DOI
Liczba arkuszy
Słowa kluczowe
EN
Synaptoneurosomes;
Polyribosome fractionation;
RNA;
Protein
Streszczenia
Język
EN
Treść
Background: Here we describe a detailed, reliable protocol for isolation of polysomal fractions from mouse brain synaptoneurosomes. This method is an important tool to study local protein synthesis in neurons. New method: We combined rapid preparation of synaptoneurosomes by filtration with polysome profiling. We provide a detailed protocol highlighting difficulties and critical steps of: i) preparation of synaptoneurosomes; ii) polyribosome fractionation from synaptoneurosomes; iii) extraction of proteins and RNA from sucrose gradient fractions. Results: and Comparison with Existing Methods We fractionated polyribosomes from synaptoneurosomes and detected the association of Mmp9, Camk2a and Stx1B mRNA with polysomes in the unstimulated conditions. Synaptic stimulation led to increased levels of Mmp9 and Camk2a mRNA in the heavy polysomal fractions. We compared our protocol with existing methods Conclusions: We have developed a reliable, effective method to prepare polyribosomal fractions from synaptoneurosomes to study polyribosomal binding of mRNAs as an aspect of synaptic translation in vitro. (C) 2017 Elsevier B.V. All rights reserved.
Inne
System-identifier
PX-5aa7d335d5de859dddb4900a
CrossrefMetadata from Crossref logo
Cytowania
Liczba prac cytujących tę pracę
Brak danych
Referencje
Liczba prac cytowanych przez tę pracę
Brak danych