Human dihydrofolate reductase is a substrate of protein kinase CK2α
PBN-AR
Instytucja
Wydział Chemiczny (Politechnika Warszawska)
Informacje podstawowe
Główny język publikacji
en
Czasopismo
Biochemical and Biophysical Research Communications
ISSN
0006-291X
EISSN
Wydawca
DOI
URL
Rok publikacji
2019
Numer zeszytu
2
Strony od-do
368-373
Numer tomu
513
Identyfikator DOI
Liczba arkuszy
0.5
Autorzy przekładu
(liczba autorów przekładu: 0)
Słowa kluczowe
en
protein phosphorylation
site-directed mutagenesis
dihydrofolate reductase
CK2
quartz crystal microbalance
mass spectrometry
Streszczenia
Język
en
Treść
Dihydrofolate reductase (DHFR) is a prominent molecular target in antitumor, antibacterial, antiprotozoan, and immunosuppressive chemotherapies, and CK2 protein kinase is an ubiquitous enzyme involved in many processes, such as tRNA and rRNA synthesis, apoptosis, cell cycle or oncogenic transformation. We show for the first time that CK2α subunit strongly interacted with and phosphorylated DHFR in vitro. Using quartz crystal microbalance with dissipation monitoring (QCM-D) we determined DHFR-CK2α binding kinetic parameters (Kd below 0.5 µM, kon = 10.31 x 104 M-1s-1 and koff = 1.40 x 10-3s-1) and calculated Gibbs free energy (-36.4 kJ/mol). In order to identify phosphorylation site(s) we used site-directed mutagenesis to obtain several DHFR mutants with predicted CK2-phosphorylable serine or threonine residues substituted with alanines. All enzyme forms were subjected to CK2α subunit catalytic activity and the results pointed to serine 168 as a phosphorylation site. Mass spectrometry analyses confirmed the presence of phosphoserine 168 and revealed additionally the presence of phosphoserine 145, although the latter phosphorylation was on a very low level.
Inne
System-identifier
WUTcf253923a769474ca2d0b173510b9f95
CrossrefMetadata from Crossref logo
Cytowania
Liczba prac cytujących tę pracę
Brak danych
Referencje
Liczba prac cytowanych przez tę pracę
Brak danych